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號外!號外!磁珠法24孔質粒DNA小量抽提試劑盒(90-96mL)免費送樣了!

【貨號】

HA31016


【產品名稱】

磁珠法24孔質粒DNA小量抽提試劑盒(90-96mL)


【規格】

24深孔板


【產品描述】

本試劑盒可應用於對小量菌液進行質粒DNA抽提。試劑盒采用高性能納米磁珠和特殊緩衝液係統。磁珠在一定條件下對質粒DNA具有極強的親和力,當條件改變時可以可逆的釋放質粒DNA,從而達到分離純化質粒DNA的效果。整個操作過程簡便、快速。本產品可最大限度的去除蛋白質等雜質,保證提取所得質粒DNA的純度,所得質粒DNA產物可直接應用於酶切、測序、文庫篩選、連接和轉化等各種下遊分子生物學實驗。

本試劑盒可在EP管中進行手動法操作,或者與自動化核酸提取儀配合使用實現自動化高通量操作。


【試劑盒組成】

組分

規格

①  P1 buffer

8mL

②  P2 buffer

8mL

③  P3 buffer

11mL

④  磁珠混懸液

5mL

⑤  Binding buffer

16.25mL

⑥  Wash buffer

10mL

⑦  RNase A酶溶液

2uL


【貯存條件】

組分①-⑥於2~8℃保存;組分⑦於-20℃保存;其他組分室溫保存;


【實驗步驟】

一、試劑準備

1. 將組分⑦RNase A酶溶液取出1.6uL加入組分①P1 buffer中,混勻,放置4℃保存備用;

2. 在組分⑤Binding buffer中加入9.75mL無水乙醇,混勻,室溫保存備用;

3. 在組分⑥Wash buffer中加入40mL無水乙醇,混勻,室溫保存備用。

二、操作步驟

1.  樣品準備

a) 在24深孔板裏過夜培養的4mL菌液,在離心機的水平轉子上4000rpm離心15min,盡棄上清。

     注意:孔之間不要汙染。

b) 將300μL P1 Buffer加入24深孔板離心過後的菌體中,將24深孔板放置實驗桌上,貼著桌麵左右晃動,菌體充分懸浮。

     注意:使用前請添加RNase 到P1 Buffer和在懸浮菌體時液體不要濺出杜絕汙染。

c)  加300μL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中,左右緩慢搖動混合均勻(不能劇烈震蕩),進行裂解。

     注意:操作時間不能超過5min(防止基因組汙染)。

d) 再向裂解體係中加入420μL P3 Buffer,左右緩慢搖動混合均勻(不能劇烈震蕩),出現絮狀物沉澱。

e) 將裂解後的24深孔板放置在離心機的水平轉子上4000rpm離心20min。

f) 取出離心後的24深孔板,一一對應的轉移840uL上清至24 深孔板中。

     注意:在轉移過程中杜絕出現汙染,樣品並做好標記。

2. 質粒抽提

a) 準備清洗24孔深孔板,添加2 mL的Washbuffer(已添加乙醇)至新的24孔深孔板。

b) 準備洗脫24孔深孔板,添加100uL的無菌水至新的24孔深孔板。

c) 添加200uL磁珠混懸液至上述24深孔板中,完成後再加入1040uL的Binding buffer(已添加乙醇)至24孔深孔板中。

    注意:添加磁珠前混勻磁珠混懸液。

d) 放置24孔磁力套至1號板位的24孔深孔板上,2號板位放置含有樣品和磁珠24孔深孔板,3號和4號板位放置含有Wash buffer的24孔深孔板,5號板位放置100uL的超純水的24孔深孔板。

e) 運行質粒抽提儀器,進入質粒抽提專用程序,運行完成後用移液器將樣品轉移至全裙邊的96PCR板裏,轉移完成後標記項目號和質粒信息。

f) 使用分光光度計檢測A260,並進行定量,測定的濃度記錄於96PCR板上並登記excel表。


【注意事項】

1.  試劑時間長可能會出現沉澱,使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鍾幫助重新溶解,恢複澄清透明後冷卻到室溫即可使用。

2.  磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置於常溫保存。

3.  Buffer P1加入後一定要充分懸浮細菌,要保證看不到結塊的菌,否則細菌不易被裂解,質粒產量會顯著下降。

4.  Buffer P2是否有沉澱。如有沉澱可用水浴(37℃)加熱溶解,混勻後使用。

5.  基因組汙染:Buffer P2和P3加入後輕輕搖晃,防止基因組斷裂。


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