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號外!號外!磁珠法質粒DNA大量抽提試劑盒(90-100mL)免費送樣了!

【貨號】

HA31015

【產品名稱】

磁珠法質粒DNA大量抽提試劑盒 (90-100mL)

【規格】

2次

【產品描述】

本試劑盒可應用於對大量菌液進行質粒DNA抽提。試劑盒采用高性能納米磁珠和特殊緩衝液係統。磁珠在一定條件下對質粒DNA具有極強的親和力,當條件改變時可以可逆的釋放質粒DNA,從而達到分離純化質粒DNA的效果。整個操作過程簡便、快速。本產品可最大限度的去除蛋白質等雜質,保證提取所得質粒DNA的純度,所得質粒DNA產物可直接應用於酶切、測序、文庫篩選、連接和轉化等各種下遊分子生物學實驗。

推薦每次菌液使用量:高拷貝質粒推薦使用量為50ml,低拷貝質粒推薦使用量為100ml。

本試劑盒可在EP管中進行手動法操作,或者與自動化核酸提取儀配合使用實現自動化高通量操作。

【試劑盒組成】

組分

規格

①  P1 buffer

100mL

②  P2 buffer

100mL

③  P3 buffer

140mL

④  磁珠混懸液

60mL

⑤  Binding buffer

225mL

⑥  Wash buffer

128mL

⑦  RNase A酶溶液

5uL

【貯存條件】

組分①-⑥於2~8℃保存;組分⑦於-20℃保存。

 【實驗步驟】

一、試劑準備

1、  將組分⑦RNase A酶溶液取出2uL加入組分①P1 buffer中,混勻,放置4℃保存備用;

2、  在組分⑤Binding buffer中加入135mL無水乙醇,混勻,室溫保存備用;

3、  在組分⑥Wash buffer中加入512mL無水乙醇,混勻,室溫保存備用。

二、操作步驟

1.  樣品準備

a)   過夜培養的菌液,轉移至50 mL離心管,在離心機的水平轉子上4000 rpm離心10 min,盡棄上清。

b)   將5 mL P1 Buffer(已加入RNaseA酶溶液)加入至50 mL離心管,菌體充分懸浮。

c)    加5 mL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中,緩慢搖動混合均勻(不能劇烈震蕩),進行裂解。操作時間不能超過5min,防止基因組汙染。

d)   再向裂解體係中加入7 mL P3 Buffer,緩慢搖動混合均勻(不能劇烈震蕩),出現絮狀物沉澱。

e)    將中和後的50 mL離心管在離心機的水平轉子上4000 rpm離心20 min。

f)    取出離心後的50 mL離心管,轉移14 mL上清至新的50 mL離心管中。

2.  質粒抽提

a)    添加2.5 mL磁珠至上述新的50 mL離心管中,完成後再加入16.5 mL的Binding buffer(已加無水乙醇)至新的50 mL離心管中。

b)    放置旋轉架上,孵育10 min。

c)    放置磁力架上,靜置1-2 min,盡棄上清。

d)    加入30 mL Wash buffer(已加無水乙醇)至新的50 mL離心管中,放置旋轉架上,孵育1 min。重複一次。

e)    放置磁力架上,靜置1-2 min,盡棄上清。

f)    放置37℃培養箱 10 min,直到磁珠中酒精蒸發完全。

g)    加入500-1mL無菌水溶解,孵育3-5 min。

h)    放置磁力架上,靜置1-2 min,轉移上清之EP管中。

i)     使用分光光度計檢測A260。

【注意事項】

1. 試劑時間長可能會出現沉澱,使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鍾幫助重新溶解,恢複澄清透明後冷卻到室溫即可使用。

2. 磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置於常溫保存。

3. Buffer P1加入後一定要充分懸浮細菌,要保證看不到結塊的菌,否則細菌不易被裂解,質粒產量會顯著下降。

4. Buffer P2是否有沉澱。如有沉澱可用水浴(37℃)加熱溶解,混勻後使用。

5. 基因組汙染:Buffer P2和P3加入後輕輕搖晃,防止基因組斷裂。


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